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        進入掃描電鏡之前的樣品要經過哪些處理流程

        日期:2022-08-19

         進入掃描電鏡之前的樣品要經過哪些處理流程?下面澤攸科技小編為您介紹。掃描電鏡一種新型的電子光學儀器。它具有制樣簡單、放大倍數可調范圍寬、圖像的分辨率高、景深大等特點。數十年來,掃描電鏡已廣泛地應用在生物學、醫學、冶金學等學科的領域中,促進了各有關學科的發展。

          在進行掃描電鏡觀察前,要對樣品作相應的處理。掃描電鏡樣品制備的主要要求是:盡可能使樣品的表面結構保存好,沒有變形和污染,樣品干燥并且有良好導電性能。

          樣品的初步處理

          (一) 取材

          掃描電鏡來說,樣品可以稍大些,面積可達8mm×8mm,厚度可達5mm。對于掃描電鏡易卷曲的樣品如血管、胃腸道粘膜等,可固定在濾紙或卡片紙上,以充分暴露待觀察的組織表面。

          (二) 樣品的清洗

          用掃描電鏡觀察的部位常常是樣品的表面,即組織的游離面。由于樣品取自活體組織,其表面常有血液、組織液或粘液附著,這會遮蓋樣品的表面結構,影響觀察。因此,在樣品固定之前,要將這些附著物清洗干凈。

          (三) 固定

          固定所用的試劑和透射電鏡樣品制備相同,常用戊二醛及鋨酸雙固定。由于樣品體積較大,固定時間應適當延長。也可用快速冷凍固定。

          (四) 脫水

          樣品經漂洗后用逐級增高濃度的酒精或丙酮脫水,然后進入中間液,一般用醋酸異戊酯間液。

          樣品的干燥

          掃描電鏡觀察樣品要求在高真空中進行。無論是水或脫水溶液,在高真空中都會產生劇烈地汽化,不僅影響真空度、污染樣品,還會破壞樣品的微細結構。因此,樣品在用電鏡觀察之前要進行干燥。干燥的方法有以下幾種:

          (一) 空氣干燥法

          空氣干燥法又稱自然干燥法,就是將經過脫水的樣品,讓其暴露在空氣中使脫水劑逐漸揮發干燥。這種方法的優點是簡便易行和節省時間;它的主要缺點是在干燥過程中,組織會由于脫水劑揮發時表面張力的作用而產生收縮變形。因此,該方法一般只適用于表面較為堅硬的樣品。

          (二)臨界點干燥法

          臨界點干燥法是利用物質在臨界狀態時,其表面張力等于零的特性,使樣品的液體完全汽化,并以氣體方式排掉,來達到完全干燥的目的。這樣就可以避免表面張力的影響,較好地保存樣品的微細結構。此法操作較為方便,所用的時間也不算長,一般約2~3小時即可完成,所以是常用的干燥方法。

          (三) 冷凍干燥法

          冷凍干燥法是將經過冷凍的樣品置于高真空中,通過升華除去樣品中的水分或脫水劑的過程。冷凍干燥的基礎是冰從樣品中升華,即水分從固態直接轉化為氣態,不經過中間的液態,不存在氣相和液相之間的表面張力對樣品的作用,從而減輕在干燥過程中對樣品的損傷。

          樣品的導電處理

          生物樣品經過脫水、干燥處理后,其表面不帶電,導電性能也差。用掃描電鏡觀察時,當入射電子束打到樣品上,會在樣品表面產生電荷的積累,形成充電和放電效應,影響對圖象的觀察和拍照記錄。因此在觀察之前要進行導電處理,使樣品表面導電。常用的導電方法有以下幾種:

          (一) 金屬鍍膜法

          金屬鍍膜法是采用特殊裝置將電阻率小的金屬,如金、鉑、鈀等蒸發后覆蓋在樣品表面的方法。樣品鍍以金屬膜后,不僅可以防止充電、放電效應,還可以減少電子束對樣品的損傷作用,增加二次電子的產生率,獲得良好的圖象。

          (二) 組織導電法

          用金屬鍍膜法使樣品表面導電,需要特殊的設備,操作比較復雜,同時對樣品有一定程度的損傷。為了克服這些不足,有人采用組織導電法(又稱導電染色法),即利用某些金屬 溶液對生物樣品中的蛋白質?脂類和醣類等成分的結合作用,使樣品表面離子化或產生導電性能好的金屬鹽類化合物,從而提高樣品耐受電子束轟擊的能力和導電率。


        臺式掃描電鏡

        澤攸科技-ZEM15臺式掃描電鏡


        以上就是澤攸科技小編介紹的進入掃描電鏡之前的樣品要經過哪些處理流程。更多關于掃描電鏡的問題請咨詢18817557412(微信同號)。

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        作者:澤攸科技


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